重组蛋白抗原高效制备平台
一、技术平台介绍
按照宿主细胞的类型，可将基因表达系统大致分为原核、酵母、植物、昆虫和哺乳动物细胞表达系统。与其它系统相比，哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面接近于天然的高等生物蛋白质分子。哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物，特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有较为广泛的应用。
思格生物建立了计算机辅助分析设计和开发了自主优化的真核无血清哺乳动物重组蛋白表达系统，包括CHO细胞表达系统和HEK293表达系统，可以为客户提供高质量和具有竞争力的蛋白表达和纯化服务。
二、技术特色
1)自主优化的哺乳动物细胞表达平台，表达量高；
2)计算机辅助设计，解决复杂难表达蛋白的表达问题。
3)蛋白表达保证成功率，不成功不收费！
三、实验技术流程
➢ 质粒构建
将目标蛋白克隆至思格生物优化的表达载体，通过质粒大抽，获得高质量瞬转表达质粒，经过测序验证保证序列正确。
➢ 细胞瞬转和培养
思格生物具备CHO和293F 两种有效瞬转表达体系，针对不同蛋白选择合适的蛋白表达系统，通过7天的瞬转表达，可获得高浓度蛋白上清。
➢ 蛋白纯化回收
利用AKTA 纯化目标蛋白，通过SDS-PAGE和SEC-HPLC 完成蛋白纯度鉴定,可获得高纯度目标蛋白。
四、案例分享
案例1：M01（代号）蛋白表达
M01蛋白为具有生物活性的蛋白分子，具有两个亚基组成，目前市面上无该蛋白的重组蛋白可售。接到客户委托订单后，我们进行了蛋白质的二级结构分析和三级结构预测，该蛋白存在疏水结构域和常规表达生物活性失活的风险。我们设计了多种蛋白表达策略，包括：不稳定位点氨基酸突变、双亚基偶联、增加伴侣稳定蛋白和选择适宜纯化标签等方案，经过4周的尝试和表达，成功表达了该重组蛋白，经客户验证，该蛋白生物活性良好，完全满足后续实验要求。
案例2：NT2(代号)蛋白表达
NT2 蛋白为入核蛋白、分子量接近200kd，对该蛋白进行了核定位序列分析和结构预测，为了实现该蛋白的胞外分泌表达，采用了核定位肽遮蔽策略，构建表达载体。经过表达过程中特殊试剂刺激处理，成功实现NT2蛋白在胞外的表达，但表达量无法满足用量需求。因此，在前期实验基础上，我们对表达系统进行了针对性优化，提供了该蛋白在胞外的分泌表达量，成功制备了高纯度的重组蛋白，也满足了客户用量的需求。
案例3：SARS-CoV-2相关蛋白表达
SARS-CoV-2新型冠状病毒疫情爆发后，思格生物快速研发出新冠病毒 S重组、ACE2重组蛋白等科研用工具试剂，为广大研究者在新型冠状病毒的研究以及治疗性抗体、疫苗的研发方面提供了更多支持。
五、文章引用
1. Luo, Y., Liu, S., Xue, J. et al. High-throughput screening of spike variants uncovers the key residues that alter the affinity and antigenicity of SARS-CoV-2. Cell Discov （IF=38）9, 40 (2023). https://doi.org/10.1038/s41421-023-00534-2
(北京大学发表的nature 子刊文章，实验中用到的ACE2蛋白为思格生物提供制备)
